Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展减慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常成现肝细胞自身病原体到经常成现1HG冠心病病人腹泻的令人满意率在学龄前时期就有很好的说明了，多个肝细胞自身病原体非典HG的学龄前之成处70%在血清切换后10年内入院冠心病，而随访15年的学龄前这一人口比例增高到84%。相比之下，占病人1HG冠心病一半以上的HG1HG冠心病的得病机制还从未得到充分的分析。

越来越多的人开始用作分段系统来定义1HG冠心病的令人满意：生物体在经常成现多种肝细胞自身病原体时进入第1期中，经常成现高血压诱发时进入第2期中，经常成现腹泻时进入第3期中。一些多发肝细胞自身病原体非典HG的生物体，在1期和2期，令人满意速度慢，并转变为得病的1HG冠心病。我们之前说明了了一个大在首次样品到多种肝细胞自身病原体检验后多于10年无冠心病的变慢令人满意者，这两组病患数目少，但不同之处极为指明。随后，我们发现肝细胞自身抗原特异性CD8+T细胞内质反应在令人满意比速度慢的病患之中基本上不长期存在，但在格外进一步得病和曾一度长期存在的冠心病病患之中很容易样品到。这可能表明，与令人满意病患相比，这些病患致病反应的恒定增强。

早期分析表明，尽管恒定性T细胞内质(Treg)比例短时间，但冠心病病患长期存在一些功能局限性，其之中包含对IL-2的反应战斗能力减缓。此外，冠心病病患之中的物理现象CD4+T细胞内质可能对恒定兼具抵抗性，表现为物理现象T细胞内质的诱发移向，自然产生的Treg和肾脏产生的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞内质之中IL-2反应移向。本分析的旨在是说明了了CD4+恒定性T细胞内质(Treg)在群集极比速度慢令人满意者之中的不同之处，他们的平均成年为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以人群基础上的纵向分析，在21岁此表确诊的病患配偶之中检查和1HG冠心病的危险因素。我们之前说明了了曾一度比速度慢令人满意者的不同之处，他们保证多重肝细胞自身病原体非典HG超过10年，但从未经常成现冠心病的病人腹泻，慢性或非受累致病。随后，10名之前保证无冠心病并愿意提供大量血液检验的比速度慢令人满意者归属于T和B细胞内质功能数据分析。在目前的分析之中，8名慢令人满意者(SP两组)，之中位成年43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的肝细胞自身病原体非典HG。所有的组织者都处于1HG冠心病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身病原体对某些抗原的非典HG反应，然而，一名病患仍然处于2期多于6年，但从未经常成现病人腹泻，一名病患被病人为冠心病，该实验者72岁，在采集实验检验时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析之中对该NAD同步进行了单独分析。分离成来外周血单个氘细胞内质(PBMCs)，采用多变量流式细胞内质法术和T细胞内质诱发试验分析NAD之中Treg的高频率、表现HG和功能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和回归)同步进行无行政官员聚类数据分析，分析Treg表现HG。

结果：与肥胖症NAD相比，来自慢令人满意体的清醒CD4+T细胞内质的行政官员聚类说明了，激能活的清醒CD4+ Treg高频率增高，与利尿剂诱导的TNFR相关细胞内(GITR)暗示增高有关。一名HbA1c升高的病患与令人满意比速度慢者和切换的对照两组相比，Treg谱并不相同。功能数据分析表明，与肥胖症NAD相比，来自比速度慢令人满意体的Treg诱导的CD4+物理现象T细胞内质诱发明显受损。表现为对物理现象CD4+T细胞内质CD25和CD134暗示的诱发增高。

图1 险恶的表现HG数据分析说明了，CD4+Treg亚HG在慢令人满意队列之中增高。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集地在来自所有NAD的能活CD4+CD45RA -细胞内质上。根据上面物暗示鉴别成10个元簇:清醒T细胞内质_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞内质;HLA-DR + GITR +清醒T细胞内质;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用作9个不同Treg上面分解成的10个元簇的MST。每个链表值得一提的是一个一个大(100个一个大)，格外大的元一个大(10个元一个大)在链表两组周边上色。每个链表之中的饼图对此单个上面的暗示级别。(b)每个元聚类的热图，以说明了全面性上面暗示。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)分解成图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比丰度为每个metacluster木箱该图表(丰度> 0.05%)未确定为HD和SP两组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞内质(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞内质(l)。黄色左上方值得一提的是捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

图2 用作CITRUS的预测模HG声称，Treg高频率的增高是令人满意比速度慢的徽章。分级制度诱导(a - f)和柑橘数据分析(g-k)来得SP组织者和切换的HD组织者在CD4+CD45RA−T细胞内质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族群的值得一提的是性图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示同步进行分离成来，三维FlowSOM族群。(b) HD(环纹)和SP(蓝点)两组以及NADSP 606(黄色)之中CD25+ cd127的高频率综合图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+诱导开集的木箱该图表;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，箭头突成的簇被辨别为SP和HD队列彼此间的不同。(j)木箱该图表说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组之中，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相比丰度(人口比例)。(k)加权说明了每个簇的表现HG(深紫色)和Treg上面相比暗示与故事情节暗示(紫色);上列，磁盘Treg_3;下面悄悄，磁盘Treg_4。故事情节与所有其他簇之中上面的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

图3 与肥胖症献血者相比，令人满意比速度慢者清醒treg的GITR增高。每个清醒CD4+T细胞内质元簇(清醒T细胞内质_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞内质;HLA-DR + GITR +清醒T细胞内质;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个暗示上面的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的暗示热图(sp606不包含在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR暗示串联，说明了加权(c)和综合图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有NAD包含，p< 0.05(紫色)NADSP 606和切换的HD不包含在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR暗示，从分级制度诱导，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(黄色)串联，说明了加权(e)和综合图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

图4 来自比速度慢令人满意的CD4+ treg细胞内质掌控物理现象CD4+T细胞内质的战斗能力减缓。SP两组用紫色的该线和左上方对此，HD两组用灰色的该线和左上方对此，黄色的该线/左上方对此NADsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内质同步进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上面为CFSE, Treg按观察的人口比例氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再造细胞内质，培育3同一天同步进行流式细胞内质法术样品。(a-d)与CD4+这样的话者相比应的treg培育(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培育。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE诱发倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发倍数。用作非典HG对照(激能活的响应细胞内质内含treg)计算诱发倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

图5 物理现象CD4+T细胞内质对比速度慢令人满意的T细胞内质再造的诱发格外引人注意。SP两组用紫色的该线和左上方对此，HD两组用灰色的该线和左上方对此，黄色的该线/左上方对此NADsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内质同步进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上面，treg按观察的人口比例氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再造细胞内质，培育3同一天同步进行流式细胞内质法术(CD25反染)和细胞内质因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培育。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE诱发花红(b)。(c,d) CD25诱发花红(c)和CD134诱发花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育之中的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

推论：我们算成的推论是，来自比速度慢令人满意子的再造清醒CD4+Treg在GITR暗示之中得到了扩展和多样，忽视了进一步分析Treg在1HG冠心病不确定性生物体之中的举例来说的必要性。

原文成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28